Среда Раппопорта является средой обогащения и дифференциально-диагностической средой. В ее состав входит: желчный бульон 10%, 2% глюкоза, индикатор (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью; в щелочной среде бесцветный, в кислой – красный). Назначение: для накопления тифо-паратифозных бактерий при посеве крови больного, а также для ориентировочной дифференциации тифо-паратифозных бактерий. Принцип д-я: при росте тифо-паратифозных бактерий из-за ферментации глюкозы происходит диффузное помутнение и покраснение среды. Для паратифозных бактерий, в отличие от брюшно-тифозных, наличие в поплавке газа.
В настоящее время известно, что вагинальная микробиота состоит из множества грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов с преобладанием строгих анаэробных видов 36. Вагинальная микробиота претерпевает изменения в зависимости от возраста, рН микроокружения и гормональных изменений. При рождении материнский эстроген стимулирует отложение гликогена во влагалищном эпителии, благоприятствуя размножению лактобактерий. После устранения гормона наблюдается повышение вагинального рН до величины, близкой к нейтральности.
Между половым созреванием и менопаузой эстроген способствует созреванию и дифференциации вагинального эпителия в зрелых, богатых гликогена клетках. Гликоген метаболизируется, что приводит к получению лактата и вагинальному подкислению. Низкий вагинальный рН в течение плодородного периода жизни является основным механизмом контроля микробной популяции. Молочная кислота и некоторые жирные кислоты, вырабатываемые лактобактериями, могут способствовать вагинальной кислотности, но это не обязательно является основным источником кислотности.
Среда Эндо Состав: МПА, лактоза, индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия. Назначение: для рассева исследуемого материала с целью получения изолированных колоний. Принцип д-я основан на способности некоторых микроорганизмов разлагать или не разлагать лактозу (сальмонеллы не разлагают и образуют бесцветные колонии).
Жирные кислоты и, в частности, лактат, продуцируемые эпителиальными клетками, вероятно, являются наиболее важным механизмом. Дистальная часть уретры представляет собой микробиоту, подобную той, которая обнаружена на коже, но в относительно небольшом количестве. Остальная часть мочевого тракта стерильна.
Порошковые инфекции мочевых путей могут быть связаны с дисбалансом микроорганизмов уретры. Пациенты, более подверженные инфекциям мочевыводящих путей, увеличивают количество грамположительных анаэробов, главным образом бактериоидов. Эпителиальные клетки мочевого тракта имеют ограниченное количество рецепторов для бактериальной адгезии и, возможно, у людей, которые более восприимчивы к инфекциям мочевых путей, больше этих рецепторов. Из вышесказанного можно сделать вывод, что коренная микробиота человеческого тела состоит из организмов, которые в равновесных условиях сосуществуют с хозяином, не причиняя ущерба.
Среда Левина является слабо селективной и дифференциально-диагностической. В ее составе МПА, тактоза, индикаторы: эозин и метиленовый синий, калий гидрофосфат. Назначение и принцип д-я см. среду Эндо.
Среда Рессела Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0,1%, индикатор (водный голубой и розоловая к-та; в щелочной среде розовая, в кислой – синяя). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выделения чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе и лактозе. Принцип д-я:
На его состав влияют, в частности, несколько факторов, таких как возраст и диета. Микробиота выполняет многочисленные функции. Среди полезных функций для хозяина можно упомянуть стимуляцию иммунной системы, вмешательство в колонизацию экзогенными патогенами и различные метаболические активности, такие как синтез витаминов. Среди видов деятельности, считающихся вредными для хозяина, местная микробиота является важным резервуаром этиологических агентов эндогенных инфекционных заболеваний и может производить потенциальные канцерогены и мешать поглощению различных веществ, включая жирорастворимые витамины.
Среда Клиглера – комбинированная, дифференциально-диагностическая. Состав: МПА, лактоза 1%, глюкоза 0,1%, натрий тиосульфат, железо II сульфат, индикатор – феноловый красный (в щелочной среде – красный, в кислой – желтый). Назначение: для отсева «подозрительных» колоний с целью выявления чистых культур и определения их ферментативной активности по отношению к глюкозе, лактозе и образования Н2S. Принцип д-я: энтеробактерии, имеющие фермент тиосульфат-редуктазу, восстанавливают тиосульфат в сульфит, при этом выделяется сероводород, который реагирует с железо-сульфатом – в рез-те образуется сульфид железа черного цвета.
Помимо этих аспектов, клинические знания о строении местной микробиоты конкретных мест могут помочь в формулировании гипотез для этиологического диагноза инфекционных процессов и, следовательно, в соответствующем выборе эмпирической терапевтической схемы. Важно подчеркнуть, что коренная микробиота в целом полезна, поэтому важно знать, что следует избегать разрыва между микробиотой и хозяином.
Местная микрофлора желудочно-кишечного тракта. Бактериальная заместительная терапия: адаптация «бактериальной войны» к профилактике инфекции. Повреждение флоры в здоровье и болезни. Формирование биопленки как микробиологическое развитие. Нормальная флора в здоровье и болезни. Биологическая и клиническая основа инфекционных заболеваний. Филадельфия: Сондерс; п. 5.
Серологическая идентификация выделенной чистой культуры с помощью адсорбированных монорецепторных О- и Н- агглютинирующих сальмонеллезных сывороток. Серологическая идентификация проводится в реакции агглютинации на стеке с агглютинирующими адсорбированными сальмонеллезными О- и Н-сыворотками, эти сыворотки м.б. 2-х видов: монорецепторными и поливалентными, их получают из видовых иммунных сывороток методом адсорбции антител по Кастеллани.
Механизмы микробной болезни. Уильямс и Уилкинс; п. 11. Сопротивление колонизации пищеварительного тракта у обычных и обработанных антибиотиками мышей. Может ли бактериальная интерференция предотвращать инфекцию? Паразитарные инфекции у бессеменных животных.
Бактериальный вклад в развитие кишечника млекопитающих. Бактериальная транслокация из желудочно-кишечного тракта. Влияние антимикробных агентов на экологический баланс микрофлоры человека. Пробиотики в первичной профилактике атопической болезни: рандомизированное плацебо-контролируемое исследование. Отличительные особенности микрофлоры неонатальной кишки у младенцев, у которых атопия была и не развивалась. Микробная экология кожи человека в области здоровья и болезней.
Серологическая идентификация протекает последовательно в 3 этапа:
1) Установление принадлежности культуры к серогруппам А, В, С, D, Е, рода Salmonella. При этом используют поливалентную О-сыворотку, содержащую антитела против антигенных рецепторов 2, 3, 4, 7, 9, 10. Монорецепторные О-сыворотки применяют против редких серогрупп. При диагностике паратифа А и В, брюшного тифа можно использовать смесь О-сывороток, сорержащих антитела к рецепторам 2, 4, 9.
Кожная микрофлора и бактериальные инфекции кожи. Техасского медицинского отделения. Анаэробная микрофлора человеческого организма. Бактериальная колонизация одноразовых мягких контактных линз больше во время инфильтративных событий роговицы, чем при бессимптомном увеличенном износе линз.
Нормальная микробная флора наружного ушного канала у здоровых норвежских людей. Микробиология нормального внешнего слухового канала. Изучение общей аэробной флоры человека. Культурно-независимый молекулярный анализ микробных составляющих здорового внешнего уха человека.
2) При положительном рез-те для определения принадлежности испытуемой культуры к определенной серогруппе ставят р-цию агглютинации раздельно с каждой монорецепторной О-сывороткой, входившей в состав поливалентной: рецептор 2 относится к серогруппе А, рецептор 4 – к серогруппе В, рецептор 7 – к серогруппе С и т.д.
3) После определения серогруппы, определяем ее видовую принадлежность при помощи р-ции агглютинации с адсорбированными монорецепторными Н-сыворотками против Н-антигенов 1-й фазы сальмонелл, входящих в состав данной серогруппы. Затем проводят р-цию агглютинации с адсорбированными Н-сыворотками против Н-антигенов 2-й фазы и окончательно устанавливают антигенную формулу испытуемой культуры.
Бактериология наиболее часто встречающихся пероральных анаэробных инфекций. Резидентная аэробная микробиота взрослой человеческой полости носа. Микробная экология желудочно-кишечного тракта. Микробная флора нормального пищевода. Нормальная человеческая микрофлора - состав. Нормативная и защитная роль нормальной микрофлоры.
Нью-Йорк: Стоктон Пресс; стр. 3. Роль играет лактобактериями в контроле популяции вагинальных патогенов. Периуретральная анаэробная микрофлора у девочек, очень восприимчивых к инфекциям мочевых путей. Этот Председатель хочет предложить новое видение микробиологии и инфекционных заболеваний, представив самую фундаментальную работу в области микробиологии, сердце дисциплины, а также на ее интерфейсах, особенно с клеточной биологией и иммунологией, которые являются очень плодородными оригинальных открытий.
Бактерионосительство при брюшном тифе. Какими серологическими реакциями можно подтвердить хроническое бактерионосительство? Диагностикумы, используемые для этой цели. Единственным доказательством бактерионосительства является выделение от носителя культур S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B, с помощью вспомогательных методов: серологическая р-ция и алергическая кожная проба с Vi-тифином (он содержит Vi-антиген, который при взаимодействии с Vi-антителами дает местную аллергическую р-цию в виде покраснения и припухлости в течении 20-30 минут). Положительная р-ция с Vi-тифином говорит о том, что в орг-ме есть Vi-антитела и возможно S. typhi.
На этой фундаментальной основе представлены последние события, касающиеся инфекционных заболеваний: физиопатологические и иммунопатологические механизмы, применения в области диагностики, эпидемиологии, терапии и профилактики, особенно вакцины. Каждый курс иллюстрируется семинаром, в котором обсуждается связанная с этим тема, заданная франкоязычным ученым в этой области. Международный симпозиум на английском языке закрывает годовую программу.
Он состоял из трех основных частей, которые показали, что будет основными темами моего обучения в течение первых лет: окружающий нас микробный мир, комменсалы и патогены; молекулярные и клеточные механизмы инфекций; наконец, основные проблемы борьбы с инфекционными заболеваниями с активной пропагандой роли, которую должны играть в ней исследования.
Хр. бактерионосительство подтверждается РНГА. При этом используются Vi-диагностикум, т.к. при формировании брюшнотифозного бактерионосительства хар-но проявление Vi-антител; диагностический титр р-ции 1:40.
Способы заражения брюшным тифом. Источник инфекции. Заражение брюшным тифом происходит только оральным путем. Источником инфекции являются больные люди и бактерионосители (представляют опасность для окружающих в течении нескольких лет после перенесенной болезни).
Вторжение патогенного микроорганизма в ткани и органы хозяина представляет собой опасность, в результате которой развилась иммунная система. Реакция на эту инфекционную опасность в первую очередь носит общий характер, это врожденный ответ, выражающий себя в основном в виде воспаления в ответ на активацию рецепторов, распознающих молекулярные структуры, свойственные микробному миру и, в более общем плане, молекулам организма. хозяин, произведенный в опасной ситуации. Иммунный ответ также является адаптивным, то есть специфическим, антигенов, экспрессируемых патогенами.
Биопрепараты, применяемые для диагностики, специфической профилактики и лечения тифо-паратифозных заболеваний.
1) Вакцина брюшно-тифозная спиртовая сухая содержит инактивированные этиловым спиртом лиофилизированные брюшно-тифозные бактерии, применяется для профилактики брюшного тифа у взрослых.
2) Вакцина брюшно-тифозная Vi-полисахаридная жидкая – раствор капсульного полисахарида, выделенного из культуры брюшно-тифозных бактерий, очищенного ферментативными и физико-химическими методами. После введения вакцины начинается интенсивное образование Ат и формирование резистентности через 1-2 недели. Для профилактики брюшного тифа у взрослых.
Он завершает ликвидацию инфекционного агента, инициированного врожденным ответом, и защиту хозяина от последующей инфекции одним и тем же агентом. Качество и интенсивность врожденного иммунного ответа будут зависеть от ориентации и эффективности адаптивного иммунного ответа.
Однако недавние исследования показывают, что было бы целесообразно добавить в патогенез этих факторов патогенности молекулы, способные подрывать иммунные реакции, не только врожденные, но и адаптивные. Эти факторы и их часто неожиданные цели также представляют собой неиспользованный источник инновационных целей в противоинфекционной, противовоспалительной и иммуномодулирующей терапии и в вакцинологии. Это также было продемонстрировано на симпозиуме по визуализации инфекционных процессов, особенно в контексте иммуноманипуляции.
3) Вакцина брюшно-тифозная спиртовая, обогащенная Vi-антигеном, состоит из 1+2, которые соединяют непосредственно перед применением. Вакцина стимулирует клеточных иммунитет и образование антител к О- и Vi-антигенам возбудителя брюшного тифа. Для профилактики брюшного тифа у детей 7-14 лет.
4) Бактериофаг брюшно-тифозный в таблетках с кислотоустойчивым покрытием – таблетки из концентрированного лиофилизированного фаголизата сальмонелл брюшного тифа, покрытые слоем АЦФ или содержащие пектин. Для профилактики брюшного тифа по эпидпоказаниям в семейном очаге, больнице, населенном пункте и т.д.
Контроль клеточного цитоскелета патогенами: инвазия и подвижность
То, что широко известно как клеточная микробиология, в значительной степени было создано на стыке микробной токсинологии и клеточной биологии. Регулярно идентифицируются новые эффекторы, секретируемые или вводимые в клетки выделенными системами секреции. Второй курс позволил мне рассматривать механизмы подрывной деятельности клеточных цитоскелетных вирусов и основные клеточные функции, такие как цикл и баланс жизни.
Дано Освальдом, специалистом по «цикломодулинам», широким семейством токсинов, которые регулируют цикл инфицированной клетки с помощью различных ферментативных действий. Это особенно касается колибактина, который он обнаружил несколько лет назад со своей группой.
5) Бактериофаг сальмонеллезный групп АВСDЕ – фильтрат фаголизатов, наиболее распространенных сальмонеллезных бактерий (более 10 видов), выпускают в жидком виде и в таблетках с кислотоустойчивым покрытием. Для профилактики и лечения сальмонеллезов.
Сальмонеллез.
Особенности антигенного строения сальмонелл (О -, Н -, Vi –антигены), их химическая природа, локализация. Классификация сальмонелл по Кауфману-Уайту. Серогруппы, серовары. О-антиген (соматический) – термостабильный, располагается в клеточной стенке, по своей природе явл-ся полисахаридно-белково-липидным комплексом. Специфичность этого антигена зависит от того, с каким полисахаридом он связан (он разный у сальмонелл различных групп). Антигенные рецепторы обозначаются цифрами – 1, 2, 3 и т.д.
Подрыв иммунитета - бактерии
Этот семинар показал, как патогенные бактерии и вирусы разделяют общие стратегии для подрывной деятельности крупных клеточных функций, таких как цикл. Недавние данные также указывают на наличие эффекторов, изменяющих адаптивный ответ.
Хореография иммунных реакций и его подрывная терапия патогенами
Этот семинар, озаглавленный «Хореграфия иммунных реакций и его подрывная терапия патогенами», показал, насколько разрешилось теперь изучение контрацепции и взаимодействия клеток иммунной системы, особенно Т-клеток и дендритных клеток.К-антиген (футлярный) – термолабильный, находится в клеточной стенке более поверхностно, чем О-антиген. У сальмонелл есть М-Аг и Vi-Аг, которые относятся к К-антигенам.
Н-антиген (жгутиковый) – термолабильный, по своей природе это белок (флагеллин), располагается в жгутиках. У бактерий одного и того же вида он может состоять из двух комплексов, которые отличаются по серологической специфичности. Это двухфазные бактерии, для каждой из фаз хар-ны соответствующие антигенные комплексы: антигены 1-й фазы (специфической), обозначаются буквами a, b, c и т.д.; а антигены 2-й фазы (неспецифической) – 1, 2, 3 и т.д.
Подрыв иммунитета - вирусы
Бифонический микроскоп стал основным инструментом этих подходов к анализу. Четвертый и пятый курсы были названы: «Подрыв иммунитета - вирусы». Это были вирусные контрагенты бактериальной иммуно-подрывной терапии, которые лечились в предыдущем курсе. Комплексный курс, поскольку бактериальные стратегии, хотя и разнообразны, остаются относительно в рамках молекулярных механизмов, довольно распространенных от одного патогена к другому, особенно в грамотрицательных бактериях, поскольку вирусные стратегии имеют бесконечное разнообразие и огромной сложности.
Кауфман и Уайт на основе антигенной структуры разделили всех представителей рода сальмонеллы на серологические группы, основанные на признаке общности О-антигенов, где каждая группа имеет определенного антигенного рецептора, которого нет у представителей других групп. Внутри группы сальмонеллы делятся на виды (серовары) по различию строения Н-антигенов 1 или 2 фазы.
Кожа и антималярийный иммунитет
Поэтому мне пришлось сделать два курса, а не один по этому вопросу, и, несмотря на это, нужно быть избирательным. Этот семинар под названием «Кожа и антималярийный иммунитет» выявил сверхрегулярные стратегии взаимодействия иммунных клеток хозяина после внутрикожной инокуляции трофозоита анафелями и вторичными стадиями внутрипеченочного развития. этого же спорозоита.
Эта работа выявила некоторые неожиданные шаги в иммунном контроле развития паразита у хозяина и предлагает потенциальные новые стратегии вакцинации. Отсюда и название этого курса: Вакцины впереди: новые потребности, новые концепции, новые подходы, какая парадигма вакцины в двадцать первом веке? Восемь исследователей были «приглашены» двумя признанными на международном уровне исследователями за выдающийся вклад, который дал вступительное слово. Другой, Дидье Троно, представил работу своей группы по механизмам наблюдения и контроля эндогенных ретровирусов, присутствующих в геноме млекопитающих.
Основные источники сальмонеллезной инфекции. Возбудители, их морфологические свойства и биохимические тесты, применяемые для дифференциации сальмонелл. ПТИ чаще всего вызываются саальмонеллами, входящими в серогруппы В, С, D, Е, т.е. заб-ния являются зооантропонозными. Источником инфекции S. typhimurium (серогруппа В) м.б. мыши, голуби, домашние птицы и их яйца, вторичным м.б. заражены другие продукты. Источником инфекции S.choleraesuis (серогруппа С) – свиньи; источник инфекции S. enteritidis (серогруппа D) – крупный рогатый скот.
Факторы патогенности сальмонелл, вызывающие пищевые токсикоинфекций. Обладают факторами адгезии и колонизации, факторами инвазии. У них есть эндотоксин с широким спектром д-я, многие из них обладают энтеротоксинами (LT и/или ST-токсины), которые нарушают ф-ции аденилат- и гуанилатциклазной систем энтероцитов --- нарушение водно-солевого обмена --- диарея. У некоторых сальмонелл есть цитотоксин, который нарушает синтез белка в эритроцитах --- гиперсекреция и нарушение энтеросорбции жидкости в тонком кишечнике --- диарея.
В патогенезе большую роль играет попадание с пищей большого кол-ва возбудителей. Попав в кишечник сальмонеллы прикрепляются к его эпителию и начинают размножаться --- в подслизистое пространство и лимфатические образования стенки киш-ка (далее там размножаются и погибают, высвобождая эндотоксин), т.к. попадает также эндотоксин извне, то происходит его массивное накопление --- интоксикация (тяжелая, с лихорадкой, нарушениями со стороны НС и ССС) и диарея. Если сальмонелл в орг-м с пищей попало малое кол-во, то заб-е протекает по типу гастроэнтерита с диареей, но без интоксикации и повышения температуры.
Перечислите исследуемые материалы и этапы бактериологической диагностики пищевой сальмонеллезной инфекции. Материалами являются испражнения, моча, рвотные массы, промывные воды желудка, пищевые продукты.
На предварительном этапе посев материала на селенитовую среду или среду Мюллера – рост культуры вызовет помутнение среды. На 1-м этапе посев на чашке со средами Эндо, Плоскирева, висмульт-сульфит агар (на средах Эндо и Плоскирева выросли полупрозрачные бесцветные lac- колонии, на висмульт-сульфит агаре коричневые и черные). На 2-м этапе - пересев подозрительных колоний уколом и штрихом на комбинированные среды Клиглера или Рессела. На среде Клиглера столбик желтый, скошенная часть розового цвета, почернение в нижней части среды, в среде пузырьки газа. На среде Рессела – столбик синего цвета, скошенная часть розовая, пузырьки газа. На 3-м этапе – идентификация: а) морфологические св-ва – в мазке, окрашенном по Граму (при микроскопии видны грамотрицательные палочки с закругленными концами); б) б/хим св-ва – в тест-системе АPI-20Е; в) серологическая идентификация. На 4-м этапе производится учет полученных рез-тов и заключение.
Среда Мюллера – среда обогащения. Состав: МПБ, мел, р-р Люголя, натрий тиосульфат. Назначение: для накопления сальмонелл при посеве материала с малым кол-вом возбудителя и/или сильно загрязненного сопутствующей флорой. П/д: тетратионат натрия, который образуется в среде, подавляет рост сопутствующей флоры --- способствует росту сальмонелл; среда мутнеет.
Селенитовая среда – среда обогащения. Состав: пептонная вода, лактоза, фосфатный буфер, натрий гидроселенит. Назначение: для накопления сальмонелл и шигелл. П/д: натрий гидроселенит подавляет рост сопутствующей флоры --- способствует росту сальмонелл и шигелл; среда мутнеет.
Висмут-сульфит агар – селективная среда. Состав: МПА, сульфит висмута, сульфат железа, фосфат натрия, бриллиантовый зеленый. Назначение: для рассева исследуемого материала с целью получения изолированных колоний сальмонелл и протея. П/д: сальмонелла образует из сульфата железа сероводород, который взаимодействует с бесцветным сульфитом висмута и переводит его в сульвит висмута черного цвета (поэтому колонии сальмонелл черного цвета). Рост гр+ флоры и многих энтеробактерий подавляется.
Среда Гисса – дифференциально-диагностическая. Состав : МПА (0,4%), углеводы, индикатор: бромкрезол пурпурный. Назначение: определение спектра сахаролитической активности с целью идентификации выделенной культуры энтеробактерий, а также и др. бактерий. П/д: при ферментации углевода до кислых продуктов цвет среды переходит в желтый, при газообразовании – пузырьки.
Серологическая идентификация выделенной культуры сальмонелл.
Последовательность серологической идентификации:
1) культуры испытывают в р-ции агглютинации с адсорбированной поливалентной О-сывороткой, содержащей антитела против антигенных рецепторов 2, 4, 7, 9, 3, 10.
2) При положительном рез-те ставят р-цию агглютинации раздельно с каждой монорецепторной О-сывороткой, которая входила в состав поливалентной: рецептор 2 (серогруппа А), рецептор 4 (серогруппа В), рецептор 7 (серогруппа С) и т.д.
3) После того, как установят серогруппу, к которой относится культура определяют ее видовую принадлежность (серовариант) с помощью р-ции агглютинации с адсорбированными монорецепторными Н-сыворотками против Н-антигенов первой фазы сальмонелл, входящих в состав данной серогруппы. Далее р-ция агглютинации с адсорбированными Н-сыворотками против Н-антигенов 2 фазы и окончательно устанавливают антигенную формулу испытуемой культуры.
Генерализованный сальмонеллез. Наиболее часто выделяемый возбудитель - госпитальные штаммы S. typhimurium, которые адаптировались к орг-му чел-ка. Возникает в условиях стационара как внутрибольничной инфекции. Источником явл-ся не только пищевые продукты, но и бактерионосители. Контактно-бытовой путь распространения. Это ОКИ с длительным тяжелым течением по типу тифоидной или токсикосептической инф-ии. Им присущи все факторы патогенности, характерные для S. typhimurium, а также отличаются повышенной вирулентностью, длительным сохранением на объектах внешней среды и обладают резистентностью ко многим а/б.
Сухая среда Эндо (модификация по ГОСТ 18963 - 73) готовится из сухого препарата по прописи на этикетке. Затем охлаждают до 60 - 70 С и вносят на 100 мл среды 0 2 мл 10 % - ного фильтрованного спиртового раствора основного фуксина и 0 8 мл 5 % - ндш воднсш раствора фенола во избежание зарастания посевов споровыми аэробными бактериями. Горячую среду разливают в чашки Петри и хранят в холодильнике не более 2 - 3 дней.
Среду Эндо разливают в чашки по 15 мл. Перед посевом чашки Петри со средой приносят из холодильника и подсушивают приоткрытыми в термостате. На поверхность среды Эндо вносят 0 2 - 0 5 мл исследуемой воды соответствующего разведения и распределяют стерильным стеклянным шпателем по всей поверхности агара. Для посева необходимо брать те разведения, при которых на чашках вырастало бы не более 50 характерных колоний кишечной палочки. При внесении воды чашку приоткрывают, пипеткой не касаются поверхности среды, последнюю каплю снимают прикосновением пипетки к внутренней стенке чашки. При отсутствии специального аппарата для подсушивания чашки с посевами помещают открытыми в термостат до полного испарения воды, после чего закрывают крышками и ставят в термостат вверх дном на 24 ч при 37 0 5 С.
На среде Эндо с желатином уже в первично м посеве через 24 ч можно исключить из учета желатиноразжижающие бактерии - аэромонады, серрации, большинство штаммов протея и псевдомонад.
Снятые со среды Эндо фильтры помещают в сушильный шкаф, в, котором температура предварительно доведена до 170 - 180 С. Затем нагревание шкафа прекращают, выключив его из сети. Фильтры вынимают из шкафа после того, как температура снизится до 40 - 50 С. Обеззараженные фильтры с результатами посева наклеивают в графе Примечание журнала анализов или в отдельной тетради.
При приготовлении среды Эндо следует учитывать воду, вводимую впоследствии с молоком.
Колонии на среде Эндо также отличаются в течение первых 24 ч выращивания.
В готовую и слегка охлажденную среду Эндо перед розливом в чашки добавляют на 100мл 0 1 - 0 2 мл 10 % спиртового раствора основного фуксина, 0 2 мл 5 % спиртового раствора розоловой кислоты, 10 мл стерильного снятого молока, тщательно смешивают, устанавливают рН 7 3 - 7 4 и разливают в чашки тонким слоем. При приготовлении среды Эндо следует учитывать воду, вводимую впоследствии с молоком.
В чашку со средой Эндо вносят 1 мл воды из каждого разведения и распределяют равномерно шпаделем по поверхности среды. Посевы инкубируют при 43 С в течение 24 часов. Затем учитывают наличие на поверхности среды Эндо типичных для кишечной палочки колоний, без их подсчета.
Материалом из колоний со среды Эндо с секторов производят посев в жидкую глюкозо-пептонную среду с содержанием 0 5 - 1 % глюкозы с поплавками. Отсутствие газообразования в посевах дает отрицательный (-) результат, наличие газообразования дает положительный () ответ на наличие фекального загрязнения воды. Результат анализа выражают в виде коли-индекса или коли-титра, пользуясь соответствующими однорядовыми или трехрядо-вой таблицами.
Для выделения эшерихий используют среды Эндо и Плоски-рева, а для выделения Escherichia coll 0157: HI (ЭГКП, продуцирующих веротоксин - шигаподобный цитотоксин) - среду Мак-Конки с сорбитом.
Фильтры (снятые со среды Эндо) помещают в чашку Петри, на дне которой находится кружок фильтровальной бумаги.
Бесцветные колонии этого вида на среде Эндо первоначально напоминают колонии тифозных или паратифозных бактерий. Однако после 3 дней пребывания в термостате у них возникают небольшие, выпячивающиеся над поверхностью, резко красные (лактоза) дочерние колонии. Их рассев дает колонии двух типов: лактозодефективные бесцветные и красноокрашенные, содержащие бактерии, сбраживающие лактозу.
Определение бактерий Coli выполняется путем посева на среду Эндо, состоящую из 3 % - ного раствора МПА, насыщенного спиртового раствора краски основной фуксин, лактозы и 10 % раствора сернистокис-лого натрия.
Чашки Петри с налитой в них и застывшей средой Эндо приносят из холодильника, где они хранились, в самый последний момент перед исследованием.
Похожие статьи
